При инсульте отек мозга достигает пика через


Отёк мозга при инсульте - страшный враг человечества

Случившийся с человеком инсульт это очень серьезное явление, которое представляет собой нарушение или сбой в процессах кровообращения мозга. Его характерным последствием, в подавляющем большинстве случаев, является отёк головного мозга при инсульте. Это одно из самых опасных проявлений, которое часто становится причиной летального исхода.

В случае подозрения на возникновения кровоизлияния в мозг необходимо срочно оказать пациенту медицинскую помощь, поскольку развитие отёка происходит в достаточно короткий интервал времени после приступа. Если не предпринять своевременные меры это может вызвать необратимые нарушения.

Причины появления отёка мозга при инсульте

Основания нарушений могут иметь различную природу. Отёк головного мозга после инсульта часто происходит по причине увеличения количества водянистых скоплений в органических тканях, соединяющих нервные клетки. Их объём постепенно нарастает, сдавливая мозговые центры. При этом создаётся излишняя внутричерепная гипертензия.

Формирование инсульта, по словам врачей, часто вызывают следующие причины:

  • Атеросклероз
  • Гипертония
  • Травмы головы
  • Жизненные стрессы
  • Наличие вредных привычек
  • Преклонный возраст
  • Резкий перепад высоты
  • Высокие физические нагрузки

Бывают и другие причины – например тромбоз сосудов. Это может указывать на  нарушение кроветворных процессов, поскольку лимфатическая жидкость пытается возместить отмершие участки и защитить организм.

Симптоматика поражения

Каждый характер подобных нарушений имеет свою клиническую конъюктуру. Наиболее показательная симптоматика встречается при геморрагическом инсульте. Ишемия развивается не сразу, поэтому нарастание симптомов происходит постепенно .

Отмечается  головная боль, тошнота, головокружение, расстройство зрения. Через небольшой промежуток времени возникают более серьезные симптомы.

Их количество и сочетание может быть различным:

  • Нарушение речи и спутанность мыслей
  • Параличи рук или ног и общая мышечная слабость
  • Параличи лицевых мышц
  • Потеря зрения, нарушение слуха и дезориентация в пространстве
  • Опухоли конечностей
  • Провалы в памяти и обмороки

Характерной особенностью является то, что потеря сознания часто переходит в коматозное состояние, которое в большинстве случаев заканчивается летальным исходом. Прогноз выживаемости — не более 35% — 40%.

Отёк мозга: механизмы развития

Клеткам мозга необходимо постоянное получение энергии, снабжение которой происходит при помощи кровеносных сосудов. По ним перемещаются питательные вещества.  Между клетками и сосудами находится лимфатическая жидкость.

По мере закупорки этих сосудов различными сгустками образуется дефицит кровоснабжения. Нарушаются механизмы питания мозга, которое приводит к накоплению жидкости и трудностям с её отведением. Происходит развитие отёчности.

Визуально отёк головного мозга при любом инсульте характеризуется набуханием одной или нескольких конечностей. Возможны припухлости на отдельных частях лица, а также провисание щек или уголков рта.

Первая неотложная помощь

Способы экстренной помощи при инсульте – это комплекс приёмов, нацеленных на сохранение жизни. От времени и точности их оказания зависит шанс на восстановление мозга и функционирования нервной системы.

В том случае, если есть подозрение на инсульт нужно действовать согласно конкретному алгоритму:

  1. Не допускать паники и излишнего волнения
  2. Оценить состояние больного — давления, наличие признаков дыхания и сердцебиения
  3. Выявить характерные признаки — нарушение речевых функций, паралич и других
  4. Вызвать неотложную помощь
  5. В случае отсутствия сердцебиения и дыхания, произвести реанимационные действия — массаж сердца и искусственное дыхание
  6. Положить больного на спину в горизонтальное положение и немного приподнять голову
  7. Дать препараты, снижающие давление

Диагностика

Диагностика отёков мозга при инсульте должна быть произведена на максимально ранней стадии. Она делится на 2 группы — доврачебная, которая выполняется самим больным или окружающими его людьми и врачебная, которую проводит специалист.

Доврачебная предварительная диагностика сводится к выявлению характерных, уже упомянутых, симптомов, присущих состоянию инсульта и принятию мер по госпитализации.

В медицинском учреждении специалист может поставить конкретный диагноз только после проведения комплекса диагностических мер:

  1. Сбор информации о больном, его хронических и наследственных заболеваниях
  2. Визуальное обследование и проведение тестов
  3. Лабораторные методы исследования анализов крови
  4. Аппаратная диагностика при помощи стационарной аппаратуры

К наиболее эффективным методам аппаратной диагностики относятся следующие :

  • Компьютерная томография;
  • магнитно-резонансная томография;
  • магнитно-резонансная ангиография;
  • церебральная ангиография;
  • ультразвуковая допплерография.

Существуют также дополнительные методы исследования пациента, такие как ЭКГ, спинномозговая пункция и ряд других приёмов.

Все эти методы в совокупности или в отдельных сочетаниях дают врачу полное представление о характере отёка, его типе, объеме пораженных участков, состоянии кровеносных сосудов и других параметрах, позволяющих назначить оптимальный вариант лечения.

Профилактические и лечебные мероприятия

Очень часто бывает, что для избежания отёка мозга при инсульте достаточно регулярно проводить профилактику, направленную на корректировку режима питания и отдыха, особенно для людей, страдающих избыточным весом или склонным к гипертонии.

Необходимо периодически контролировать артериальное давление, избегать употребления алкоголя, никотина и других вредных привычек, а также эмоциональных стрессов. Вести активный образ жизни и чаще бывать на свежем воздухе, заниматься физкультурой и следить за правильным, сбалансированным питанием.

Существует целый ряд медикаментозных препаратов, а также витаминов и микроэлементов, направленных на профилактику инсультов а также народных методов. Словом, выбор достаточно широкий.

Лечение отёка мозга

Что касается лечения, то в соответствии с врачебным заключением и поставленным диагнозом назначается курс терапии, целью которой является замедление и устранение отёка, а также обеспечение оттекания лишней жидкости. Эти цели достигаются медикаментозным и хирургическим путём.

Лечение включает в себя несколько пунктов и проводится в палате интенсивной терапии или реанимационном отделении:

  1. Поддержание адекватной функции дыхания. Для этого назначаются медикаменты, стабилизирующие дыхание. Ведется регулярный мониторинг целью которого является регуляция нормального дыхания, осуществляется периодическая санация дыхательных путей, а также оксигенотерапия. В ряде случаев пациент переводится на аппарат ИВЛ.
  2. Восстановление микроциркуляции и кровообращения, для стабилизации которого назначают прием специальных препаратов, снимающих спазм сосудов. Контролируются параметры работы сердечно-сосудистой системы, проводится внутривенное вливание для поддержания необходимого уровня давления в кровеносной системе. Для разжижения крови применяют полиглюкин или макродекс.
  3. Обеспечение оттока жидкости с целью снижения внутричерепного давления. Для этого используется маннитол — препарат, выкачивающий лишнюю жидкость из мозга. Впоследствии он выводится из организма с мочой. В некоторых случаях проводят процедуру дренирования через катетер или принудительную декомпрессию при помощи трепанации части черепа.
  4. Методы устранения гипоксии включают в себя применение антигипоксических медикаментов (Цитиколин), которые снижают гипоксию и препятствуют дальнейшему развитию отёчности.

Последствия и прогноз

Отёк мозга при инсульте опасен тем, что человеку, который его перенёс в будущем могут угрожать различные негативные последствия. Частичная гибель нервных тканей может привести к ремиссии некоторых функций организма, которые зачастую уже не подлежат восстановлению, поскольку являются необратимыми.

Самыми распространёнными из них являются: искажение лицевых мышц, хронические мигрени, трудности с выполнением некоторых движений, притупление остроты восприятия органов чувств, умственные патологии различной степени тяжести.

Еще одним часто встречающимся последствием является возможность наступления рецидива. При этом его характер и тяжесть последствий усугубляется.

Реабилитация

Последствия и итоговое состояние после отёка мозга вследствие инсульта является предпосылкой к осуществлению реабилитационных мероприятий, позволяющих организму человека частично восстановиться. Они преследуют цель максимально полной общественной адаптации человека и возможности возобновления утерянных возможностей  двигательного функционирования.

Восстановление осуществляется в двух направлениях:  физиологическое и психологическое. Для психологического восстановления часто нужна помощь и консультации психолога или психиатра, а также специфические упражнения. Высокое значение имеют позитивные условия, созданные в кругу семьи.

Человеку, который проходит реабилитацию, очень важно не чувствовать себя тяжёлым бременем для родных и близких. Важно, чтобы у него было любимое занятие или интересное хобби, достаточный круг общения и возможность поделиться с кем нибудь своими мыслями.

Физиологическое восстановление способствует обретению физической дееспособности и возвращению элементарных жизненных навыков. Происходит оно с помощью лечебной гимнастики, физических упражнений и терапевтического массажа, которыми человек может заниматься самостоятельно или с посторонней помощью.

 

Ишемический отек мозга | Интернет-инсультный центр

Определение

Обычно возникает при крупных инфарктах СМА, это накопление большого количества жидкости в ткани головного мозга из-за набухания клеток, разрушения гематоэнцефалического барьера, выделения спинномозговой жидкости из эпендимной выстилки или образования тромбов или повреждения тканей. осмотическая среда, позволяющая воде перемещаться в межклеточные пространства.

Признаки / симптомы

Неврологическое ухудшение, постепенная потеря сознания, головная боль, головокружение

Диагностический тест

КТ

Варианты лечения

Нефармакологический

Гипервентиляция, поднятие головы, поддержание венозного оттока, дренирование спинномозговой жидкости, гемикраниэктомия

Фармакологический

Маннитол

  • Использование:
    Снижение повышенного внутричерепного давления из-за отека головного мозга
  • MOA:
    Вызывает отток воды из клеток во внеклеточную жидкость и из эритроцитов в плазму
  • Доза:
    0.25 - 2 г / кг внутривенно в течение 30-60 минут каждые 4-8 часов до тех пор, пока осмоляльность сыворотки не достигнет 300-310 мОсм / л. (Давление можно снизить в течение 15 минут после начала инфузии.)
  • Мониторинг:
    Функция почек, диурез, баланс жидкости, концентрация натрия и калия, центральное венозное давление
  • Побочные реакции:
    головная боль, тошнота, рвота, полиурия, обезвоживание
  • Лекарственные формы:
    15, 20 или 25% растворы
  • Варианты фармакологического исследования:
    глицерин, гипертонический раствор, мочевина, барбитураты
.

Церебральный атеротромбоз | Интернет-инсультный центр

Полная окклюзия артерии может привести к ишемическому инфаркту - области некротических клеток, вызванной нарушением кровотока.

Тромбоз может развиться за несколько минут или за часы или даже дни, чтобы полностью развиться. Инсульт, который активно прогрессирует как прямой результат усиления окклюзии и ишемии, называется инсультом в эволюции прогрессирующего инсульта [Aminoff MJ, et al. Клиническая неврология.3-е издание. Стэмфорд, Коннектикут, Эпплтон и Ланге, 1996]. Крупному кровеносному сосуду (например, сонной, средней церебральной и базилярной артериям) может потребоваться больше времени, чтобы окклюзировать, чем меньшему сосуду (например, лентикулостриатным, базилярным проникающим и медуллярным артериям), и могут быть предупреждающие признаки. Одна из самых важных - транзиторная ишемическая атака (ТИА).

При ишемическом инсульте повреждение головного мозга может быть вызвано не только инфарктом, но и отеком мозга - чрезмерным скоплением жидкости в головном мозге.Отек мозга достигает пика примерно через 2–5 дней после начала инсульта. Затем накопление жидкости обычно стабилизируется и может уменьшиться.


Кредиты
Острый ишемический инсульт: новые концепции лечения
Представление этого контента стало возможным с разрешения Genentech, Inc.
Copyright 1998-1999 Genentech Inc., все права защищены. Воспроизведение содержимого без разрешения запрещено.

.

Пиноцембрин защищает барьерную функцию кровь-мозг и расширяет терапевтический временной интервал для лечения тканевым активатором плазминогена у крыс, модель тромбоэмболического инсульта

Тканевый активатор плазминогена (t-PA) остается единственным одобренным препаратом для лечения острого ишемического инсульта, но имеет ограничительное время лечения 4,5 часа. Продолжительная ишемия вызывает повреждение гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) и увеличивает частоту геморрагической трансформации (ГТ), вторичной по отношению к реперфузии. В этом исследовании мы стремились определить эффект пиноцембрина (ПХБ; плейотропный нейрозащитный агент) на повреждение ГЭБ, вызванное введением t-PA, на новой модели тромбоэмболического инсульта у крыс.Оценивая утечку синего Эванса в ишемическое полушарие, мы продемонстрировали, что предварительная обработка ПХБ за 5 минут до введения t-PA значительно снизила повреждение ГЭБ после 2-часовой, 4-часовой, 6-часовой и даже 8-часовой ишемии. Соответственно, предварительная обработка ПХБ значительно снизила отек мозга и объем инфаркта, вызванные инфузией t-PA, и улучшила поведенческие результаты после 6-часовой ишемии. Механически предварительная обработка ПХБ ингибировала активацию MMP-2 и MMP-9 и деградацию белков плотных контактов (TJP) окклюдина и клаудина-5 в ишемическом полушарии.Кроме того, предварительная обработка ПХБ значительно снижает фосфорилирование рецептора тромбоцитарного фактора роста α (PDGFR α ) по сравнению с одним t-PA. В модели in vitro BBB PCB снижал трансэндотелиальную проницаемость при гипоксии / агликемии за счет ингибирования секреции PDGF-CC. В заключение мы продемонстрировали, что предварительная обработка ПХБ незадолго до инфузии t-PA значительно защищает функцию ГЭБ и улучшает неврологические исходы после продолжительной ишемии, превышающей обычную 4.Временное окно 5 часов t-PA. Предварительная обработка ПХБ может представлять собой новое средство повышения безопасности и терапевтического временного окна t-PA после ишемического инсульта.

1. Введение

Тромболизис активатором плазминогена тканевого типа (t-PA) - единственная одобренная FDA терапия острого ишемического инсульта; однако он имеет узкое терапевтическое временное окно от 3 до 4,5 часов после начала церебральной ишемии [1]. Отсроченное лечение t-PA после продолжительной ишемии приводит к тяжелым осложнениям, таким как геморрагическая трансформация (HT), отек мозга и повышенная смертность [2].Из-за узкого терапевтического окна и потенциальных серьезных осложнений лечение t-PA применяется менее чем к 5% пациентов с ишемическим инсультом [3]. Хотя механизмы, лежащие в основе ГТ, индуцированной t-PA, все еще неясны, повреждение гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) может вызвать ГТ [2, 4–6]. Нарушение ГЭБ после ишемического инсульта - динамический процесс, который характеризуется начальным повреждением во время ишемии и вторичным повреждением во время реперфузии [2]. Длительная ишемия приводит к серьезному повреждению ГЭБ, что резко увеличивает риск ГТ после тромболизиса t-PA.Следовательно, разработка новой адъювантной терапевтической стратегии для защиты целостности ГЭБ и увеличения терапевтического временного окна t-PA во время ишемии имеет решающее значение для улучшения результатов лечения инсульта.

Пиноцембрин (5,7-дигидроксифлаванон, ПХБ) - это природное флавоноидное соединение, которое содержится в меде, прополисе и растениях, включая корни имбиря и дикий майоран [7–9]. Поскольку первичная мишень остается неизвестной, ПХБ продемонстрировал мощные противовоспалительные и нейропротекторные эффекты за счет снижения количества активных форм кислорода (АФК) и апоптоза, модуляции функции митохондрий и защиты ГЭБ в различных моделях ишемического инсульта у животных [8–11].Кроме того, ПХБ уменьшал нейровоспаление и уменьшал объем поражения в модели индуцированного коллагеназой внутримозгового кровоизлияния и модели черепно-мозговой травмы [12, 13]. Однако остается неизвестным, является ли ПХБ защитным в клинически значимой модели ишемического инсульта, в которой церебральная артерия закупорена тромбом и реперфузирована тромболизисом t-PA. В этом исследовании мы наблюдали, что ПХБ быстро распределяется в спинномозговой жидкости (5-7 мин) и облегчает распад ГЭБ, вызванный t-PA-опосредованной ишемией / реперфузионным повреждением головного мозга у крыс.Мы исследовали, в какой степени и как ПХБ может смягчить ишемическое повреждение ГЭБ и расширить терапевтическое временное окно t-PA в новой модели тромбоэмболического инсульта на крысах, которую мы разработали ранее [14, 15].

2. Материалы и методы
2.1. Модель тромбоэмболического инсульта на животных

Все процедуры были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных в Медицинском колледже Пекинского союза и в соответствии с принципами, изложенными в Руководстве NIH по уходу и использованию лабораторных животных.Самцы крыс Sprague-Dawley (SD) (от 250 до 300 г) были приобретены у Vital River Laboratory Animal Technology Co., Пекин. Крыс анестезировали 3% изофлураном, и анестезию поддерживали от 1,0% до 1,5% газообразного изофлурана. Ректальную температуру поддерживали в пределах 37,0 ± 0,5 ° С с помощью системы нагрева с обратной связью. СМА крыс-самцов SD была закупорена тромбом, образовавшимся в общей сонной артерии (ОСА) при постоянной гальванической стимуляции, как мы ранее описали [14, 15].Вкратце, общая сонная артерия (ОСА) была рассечена, и была инициирована гальваническая стимуляция (1,00 мА), которая продолжалась в течение 225 с. Тромб был разбит 10 раз офтальмологическим пинцетом с зазубренным мягким концом и промыт в среднюю мозговую артерию (СМА) / лакунарную артерию Уиллисовским кровообращением.

Успешная окклюзия была подтверждена мониторингом фокальной перфузии головного мозга с помощью лазерной допплерографии. В исследование были включены только крысы, у которых наблюдалась стойкая ишемия с менее чем 25% от предэмболического исходного уровня.Эта модель эмболического инсульта имеет прямое отношение к тромбоэмболической ишемии у пациентов, что позволило нам сравнить эффекты пиноцембрина на осложнения t-PA в идентичных и контролируемых условиях ишемии и реперфузии.

2.2. План эксперимента

Чтобы исследовать влияние ПХБ на прогрессирование повреждения ГЭБ и его влияние на нервно-сосудистые осложнения отсроченного лечения t-PA, мы выбрали четыре продолжительности ишемии: 2 часа, 4 часа (в пределах установленных 3-4.5-часовое окно тромболитического времени), 6 часов и 8 часов (за окном). t-PA вводили внутривенно в течение 30 минут, а ткань мозга собирали через 2 часа после инфузии t-PA.

Крыс с успешной окклюзией случайным образом разделили на 6 групп: носитель, t-PA (), PCB (), P + T (), T + P () и смесь (). Каждая группа была далее разделена на 4 подгруппы с 2-, 4-, 6- или 8-часовой ишемией с последующей 2-часовой реперфузией. Схема эксперимента схематично показана на рисунке 1.Другая группа крыс использовалась для долгосрочных (7 дней) поведенческих тестов и определения смертности: носитель (), ПХБ (), t-PA () и PCB + t-PA () вводили после 6-часовой ишемии. После первоначального введения группы PCB и P + T получали только PCB каждые 24 часа, в то время как группы носителя или t-PA получали физиологический раствор в течение еще 6 дней.

Мы решили оценить влияние ПХБ на защиту ГЭБ через 2 часа после реперфузии по трем причинам: (1) ишемия / реперфузия и связанное с t-PA повреждение ГЭБ произошло быстро в течение первых нескольких часов после начала реперфузии [16, 17 ]; (2) лечение t-PA значительно увеличивало повреждение ГЭБ уже через 2 часа после инсульта [17]; (3) количество необходимых животных сводится к минимуму, поскольку длительная реперфузия приводит к высокой смертности.

2.3. Введение реагентов

ПХБ был синтезирован Департаментом медицинской химии Китайской академии медицинских наук (молекулярная масса 255,25; хроматографическая чистота> 99%). Человеческий рекомбинантный t-PA (альтеплаза, Boehringer-Ingelheim, Германия) вводили крысам через правую бедренную вену через 2, 4, 6 или 8 часов после начала окклюзии в P + T, T + P или смесь (Смешайте) группы. В группе P + T PCB вводили за 5 минут до инфузии t-PA. В группе T + P ПХБ вводили сразу после инфузии t-PA, а в группе Mix PCB и t-PA были предварительно смешаны перед введением.Носителем, использованным в этом исследовании, был физиологический раствор для инсульта (SPSS). ПХБ использовали в виде 10 мг / кг in vivo и 1 мк M in vitro . t-PA использовали в виде 1 мг / кг in vivo и 10 мкг / мкг / мл in vitro . Все эксперименты проводились вслепую. Поведенческие тесты и введение агентов проводились разными членами группы, чтобы избежать непреднамеренной предвзятости.

2.4. Церебральное распределение ПХБ

ПХБ вводили крысе через хвостовую вену.Кровь и спинномозговую жидкость собирали через 1, 3, 5, 7 и 10 мин после инъекции. Анализы выполняли на хроматографической колонке Agilent Zorbax SB-C18 (5 мкм, м, 4,6 × 250 мм) при 35 ° C с предварительной колонкой Agilent Zorbax SB-C18. Хроматографические условия и подготовка образцов были в соответствии с предыдущим отчетом [18].

2,5. Измерение результатов поведения

В конце 2-часовой реперфузии через 2 часа после операции оценивали тест на неврологический дефицит, тест с вращающимся стержнем, тест на функцию передних конечностей и тест в наклонной плоскости.В тесте на неврологический дефицит использовалась модифицированная 5-балльная шкала Бедерсона для определения неврологического дефицита у крыс [19]. Тест вращающегося стержня, тест функции передних конечностей и тест в наклонной плоскости были модифицированы и использовались для оценки гемипареза. Моторную координацию передних и задних конечностей оценивали, как сообщалось ранее [20–22].

2.6. Измерение утечки Evans Blue

Evans blue (EB; 4% вес / объем в PBS, 2 мл / кг; Sigma) вводили внутривенно в наружную яремную вену в начале реперфузии.В конце 2-часовой реперфузии крысам транскардиально перфузировали PBS. Затем мозг был извлечен, разрезан и сфотографирован для визуализации экстравазации БЭ. Мы оценили отек мозга, измерив увеличение полушария. Мы также количественно оценили нарушение ГЭБ путем измерения содержания ЭБ в ишемической ткани полушария, как сообщалось ранее [23].

2.7. Измерение отека мозга

Отек мозга определяли путем измерения отека ишемизированных тканей головного мозга.Площадь полушарий каждого среза мозга толщиной 2 мм измеряли на цифровых фотографиях, полученных с помощью программного обеспечения ImageJ (Национальные институты здравоохранения), как описано ранее [24, 25]. Набухание мозга выражали как отношение площади ишемического полушария к площади неишемического полушария.

2,8. Количественная оценка объема инфаркта

Окрашивание ТТС проводили через 24 часа после начала ишемии. Крыс умерщвляли, а затем обезглавили после смещения шейного отдела. Мозг перфузировали физиологическим раствором и 8 коронарных срезов (толщиной 2 мм) окрашивали 0.5% хлорид 2,3,5-трифенилтетразолия (ТТС) и фиксируется в 4% растворе параформальдегида. Объем инфаркта измеряли и анализировали с помощью программного обеспечения Image J. Коррекция отека проводилась, как сообщалось ранее [26]. После коррекции отека объем инфаркта рассчитывается путем суммирования площади инфаркта из всех срезов и умножения толщины.

2.9. Измерение ММП, окклюдина и клаудина-5 в тканях головного мозга

Ткани головного мозга из той же позиции, что и измерение EB, собирали после поведенческих результатов и тестов на отек и через 4 часа после ишемии.Уровни белков MMP-2, MMP-9, окклюдина и клаудина-5 измеряли с помощью вестерн-блоттинга, как описано [27]. Человеческие MMP-2 и MMP-9 (Chemicon, Temecula, CA, USA) использовали в качестве стандартного (STD) контроля. Все антитела, использованные в этом исследовании, были приобретены у Cell Signaling Technology, Inc.

2.10. Конструирование и характеристика моделей BBB In vitro

Для создания моделей BBB эндотелиальные клетки микрососудов головного мозга человека (клетки cerebEND) и астроциты (CTXTNA2) культивировали до слияния на 24-луночных вкладышах для культур тканей Transwell ™, покрытых коллагеном ( 0.4 мкм (размер пор мкм, Millipore) при 37 ° C, как показано на рисунке 6 (b). Культуры поддерживали при 37 ° C и 5% CO 2 в увлажненном инкубаторе. Среду для роста меняли каждый день, и клетки выращивали до компактного монослоя в течение примерно 3 дней.

Для моделирования ишемических условий in vitro сокультуры подвергали кислородно-глюкозной депривации (OGD), как описано [28]. Вкратце, сокультуры подвергали воздействию OGD в течение 6 часов, заменяя культуральную среду средой без глюкозы и сыворотки, которая была уравновешена в анаэробной атмосфере (при <0.1% O 2 , 5% CO 2 и 95% N 2 ) внутри инкубатора клеток. Для реперфузии клетки переносят в нормальный инкубатор (95% комнатного воздуха и 5% CO 2 ) со сменой среды (нормальная глюкоза: 5,5 мМ) и инкубируют еще 2 часа. Для нормоксических контролей сокультуры инкубировали в течение 8 часов в содержащей глюкозу бессывороточной среде, уравновешенной воздухом. Проницаемость BBB оценивали с использованием FITC, конъюгированного с декстраном 10 кДа (1 мг / мл) (Sigma-Aldrich), и измеряли интенсивность флуоресценции в нижней и верхней камере, используя считывающее устройство для микропланшетов SpectraMax M2e (Molecular Devices, Саннивейл, Калифорния).Проницаемость BBB рассчитывалась как отношение нижней / верхней камеры.

2.11. Статистический анализ

Данные были представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. В большинстве случаев статистический анализ проводился с использованием однофакторного дисперсионного анализа с апостериорным анализом Ньюмана – Кеулса. Для сравнения утечки БЭ между ишемическими полушариями и неишемическими полушариями был проведен парный -тест. Для сравнения смертности между t-PA и носителем или комбинированной терапией был проведен тест хи-квадрат ().Значение считалось статистически значимым.

3. Результаты
3.1. Фармакодинамические характеристики ПХБ соответствовали его распределению в спинномозговой жидкости

Чтобы убедиться, что ПХБ достиг адекватной концентрации в мозге перед введением t-PA, мы сначала определили фармакокинетические изменения ПХБ в плазме и спинномозговой жидкости (CSF). Мы обнаружили, что ПХБ быстро исчезает в плазме после инъекции, а пиковая концентрация ПХБ в спинномозговой жидкости появляется примерно через 7 минут после инъекции (рис. 1 (а)).Поэтому мы решили ввести ПХБ за 5 минут до введения t-PA и начала реперфузии (P + T), чтобы максимизировать потенциальные защитные эффекты ПХБ (рис. 1 (b)). ПХБ также вводили вместе или сразу после инфузии t-PA в качестве контроля (Mix или T + P, соответственно; рисунок 1 (b)).

3.2. ПХБ ослабляет прогрессирование повреждения ГЭБ после длительной ишемии

Чтобы определить, может ли ПХБ ослаблять прогрессирование ишемического повреждения ГЭБ, вызванного отсроченным тромболизисом, мы сравнили тяжесть повреждения ГЭБ с помощью трех различных способов совместного введения ПХБ и t-PA, как описано выше. через 2, 4, 6 или 8 часов ишемии с последующей 2-часовой реперфузией.Успешная окклюзия (ниже 30%) MCA тромбом и реканализация (выше 70%) t-PA была подтверждена мониторингом мозгового кровотока с помощью лазерного допплера (рисунок 1 (c)). На рисунках 1 (d) -1 (e) показана экстравазация EB через 2, 4, 6 или 8 часов церебральной ишемии. Как и ожидалось, содержание EB в неишемической ткани полушария было низким во всех испытанных условиях инсульта. Содержание EB было значительно увеличено в ишемической ткани мозга, и большая утечка EB наблюдалась при более длительной ишемии как в группах носителя, так и в группах t-PA.Одно только лечение ПХБ не влияло на экстравазацию БЭ в течение всех 4-х периодов ишемии. Интересно, что предварительная обработка ПХБ за 5 минут до инфузии t-PA (P + T) значительно снизила утечку EB после 2-часовой, 4-часовой, 6-часовой и даже 8-часовой ишемии, что намного превышает терапевтическое время t-PA в 4,5 часа. окна по сравнению с инфузией только t-PA (Рисунки 1 (d) и 1 (e)). Смешанное введение ПХБ и t-PA также значительно снизило утечку EB после 2-6 часов ишемии, но было менее эффективным (рисунки 1 (d) и 1 (e)).Введение ПХБ после инфузии t-PA оказалось неэффективным.

Отек мозга - серьезное осложнение повреждения ГЭБ. В соответствии с результатами утечки EB, инфузия t-PA привела к усилению отека мозга, измеренному по набуханию мозга после продолжительной ишемии (6 часов и 8 часов), что могло быть значительно подавлено предварительной обработкой ПХБ или смесью, но не последующей обработкой ПХБ ( Рисунок 1 (е)). Эти результаты показали, что вызванные инфузией t-PA повреждение ГЭБ и отек происходили быстро, и было очень короткое время для интервенционной защиты ГЭБ с помощью ПХБ.

3.3. ПХБ улучшенные краткосрочные поведенческие исходы после длительной ишемии

Что касается неврологических и поведенческих результатов, мы измерили балл неврологического дефицита, функцию передних конечностей, показатель теста вращающегося стержня и время удержания у крыс, получавших тромбоэмболический инсульт и различные виды лечения. Как показано на Рисунке 2, у крыс, подвергшихся эмболии в течение 2–8 часов, инфузия t-PA в целом улучшала эффективность в ранние моменты времени (2 часа и 4 часа), но не в более поздние моменты времени (6 часов и 8 часов). четыре теста через 2 ч после тромболитической терапии (рис. 2).Однако предварительная обработка ПХБ + инфузия t-PA значительно улучшила характеристики всех поведенческих тестов в поздние моменты времени (6 часов и 8 часов) по сравнению с одним t-PA. Группа Mix показала менее благоприятный эффект, чем группа P + T, но была лучше, чем группа T + P после 6-часовой ишемии. Интересно, что лечение ПХБ само по себе также улучшало поведенческие показатели крыс после 2-часовой и 4-часовой ишемии, даже если оно не вызывало реперфузии (данные не показаны), что означает, что ПХБ, возможно, достиг ишемической ткани мозга через контралатеральное кровообращение.

3.4. Предварительная обработка ПХБ снижает объем инфаркта мозга после продолжительной ишемии

Затем мы провели окрашивание ТТС, чтобы оценить влияние ПХБ на инфаркт мозга. Учитывая, что предварительная обработка ПХБ (П + Т) показала наиболее выраженный защитный эффект, мы сосредоточились на исследовании терапевтического эффекта П + Т в дальнейшем. Результаты окрашивания ТТС показали, что в отличие от повреждения ГЭБ, когда t-PA вводился в течение терапевтического временного окна (2-часовая и 4-часовая ишемия), инфузия t-PA значительно уменьшала объем инфаркта (рис. 3).Когда t-PA вводился за пределами терапевтического временного окна (6 часов и 8 часов ишемии), инфузия t-PA больше не могла уменьшить инфаркт мозга. Однако предварительная обработка ПХБ перед инфузией t-PA значительно уменьшала объем инфаркта после 6-часовой ишемии (рис. 3, <0,01). Обработка только ПХБ также показала защитный эффект на инфаркт после 2-часовой и 4-часовой ишемии, что соответствует результатам поведенческих тестов (рис. 2).


3.5. Повторное лечение ПХБ улучшило долгосрочные поведенческие результаты после отсроченного введения t-PA после длительной ишемии

Вышеуказанные результаты ясно показали, что однократная предварительная обработка ПХБ может ослабить замедленное повреждение ГЭБ, вызванное инфузией t-PA, и улучшить неврологические функции сверх стандартных 4.5-часовое временное окно. Затем мы задались вопросом, может ли повторное лечение ПХБ после первоначального введения ПХБ + t-PA еще больше улучшить долгосрочные поведенческие результаты у ишемических крыс. ПХБ + t-PA вводили после 6-часовой ишемии, как показано на рисунке 1 (b); затем ПХБ вводили каждые 24 часа в течение 7 дней. Результаты показали, что как инфузия t-PA отдельно, так и повторная обработка только PCB могут незначительно улучшить долгосрочные поведенческие характеристики (оценка неврологического дефицита, функция передних конечностей, тест с вращающимся стержнем и время выдержки; рисунки 4 (a) -4 (d) ).Важно отметить, что повторное лечение ПХБ после первоначального совместного введения П + Т существенно улучшило долговременные поведенческие характеристики.

.

Смотрите также